外泌體是什么？
外泌體（exosome）是是一種能被大多數(shù)細(xì)胞分泌的微小膜泡，這種微小膜泡中含有細(xì)胞特異的蛋白、脂質(zhì)和核酸，能作為信號分子傳遞給其他細(xì)胞從而改變其他細(xì)胞的功能。從細(xì)胞中提取外泌體后可以通過透射電鏡來分析exosome的大小、形態(tài)等，再經(jīng)過Western Blot可以分析特定蛋白在exosome中的表達(dá)情況。外泌體中的蛋白、RNA和脂肪成分特異，并且攜帶了一些重要的信號分子，其在多種疾病的早期診斷中發(fā)揮著重要的作用。
如何提取外泌體？
外泌體的提取方法有很多，例如超速離心法、密度梯度離心、超濾離心、PEG-base沉淀法、磁珠免疫法和試劑盒提取。實(shí)驗(yàn)室常用的提取方法是如下兩種：
1、超速離心法（差速離心）
超離法是常用的外泌體純化手段，采用低速離心、高速離心交替進(jìn)行（如圖所示），可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡單，獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎，但過程比較費(fèi)時，且回收率不穩(wěn)定（可能與轉(zhuǎn)子類型有關(guān)），純度也受到質(zhì)疑；此外，重復(fù)離心操作還有可能對囊泡造成損害，從而降低其質(zhì)量。
2、試劑盒提取
近幾年來，市場上已出現(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒，有的是通過特殊設(shè)計的過濾器過濾掉雜質(zhì)成分，有的則采用空間排阻色譜法(SEC)進(jìn)行分離純化，也有的則利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來。這些試劑盒不需要特殊設(shè)備，隨著產(chǎn)品不斷更新?lián)Q代，提取效率和純化效果逐漸提高，因而逐漸取代超速離心法并推廣開來。有些試劑盒操作簡便，不用超速離心，同時可獲得高純度和高回收率的外泌體。
外泌體粒徑分析、濃度檢測
外泌體粒徑分析方法為納米顆粒跟蹤分析（Nanoparticle tracking Analysis, NT A)，其原理是對每個顆粒的布朗運(yùn)動進(jìn)行追蹤和分析，結(jié)合 Stockes-Einstein 方程式計算出納米顆粒的流體力學(xué)直徑和濃度。NT A技術(shù)已被外泌體研究領(lǐng)域認(rèn)可為外泌體表征手段之一。相較于其他表征方式，NT A技術(shù)的樣本處理更簡單、更能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測速度更快。