定義

蘇木精 — 伊紅染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ，簡稱HE染色法 ，石蠟切片技術里常用的染色法之一 。蘇木精染液為堿性 ，主要使細胞核內(nèi)的染色質與胞質內(nèi)的核酸著紫藍色 ；伊紅為酸性染料，主要使細胞質和細胞外基質中的成分著紅色 。HE染色法是組織學、胚胎學、病理學教學與科研中最基本、使用最廣泛的技術方法。

常見問題

一.著色過深或者過淺

1.染色時間控制不佳，HE染色需要通過鏡檢來控制時間，可以先通過預實驗得到最佳染色時間，一般情況下新鮮蘇木素染色時間在1-3min左右，分化時間同樣不易過長，過度分化可以水洗后重新復染蘇木素。

二.染色后切片不清晰，霧化，斑點

1.烤片溫度過低，時間不夠，導致脫蠟不徹底，切片留存白色斑點，

2.染色后切片脫水時間不合理，切片上殘留水分，使切片霧化，需要優(yōu)化脫水的梯度乙醇時間，切片經(jīng)過低濃度時時間要短，向高濃度逐漸延長脫水時間

3.蓋玻片上殘留封固劑，導致切片不清晰，需要重新封片解決

4. 組織標本已發(fā)生自溶或取材后沒及時固定或固定液濃度不夠；另固定前干枯標本，染色后易出現(xiàn)灰染現(xiàn)象，很難補救。

5. 固定劑對組織有一定媒染作用，它既可與蛋白結合又能與染料結合，可增強著色能力，同時能沉淀和凝固細胞內(nèi)成分，使細胞內(nèi)成分產(chǎn)生不同折光率造成光學差異。故固定不良是造成切片染色模糊不清的主要原因。

6. 在日常病理制片中淋巴結處理不當造成切片染色后組織見發(fā)灰現(xiàn)象，其主要原因由于細胞密集，結構復雜導致固定液難以滲透到組織深部，從而造成組織中央固定不佳，而出現(xiàn)徹底發(fā)灰現(xiàn)象�？捎玫攘繜o水乙醇乙醚混合液處理切片5-10分鐘，乙醇洗，水洗，3%硫酸鐵銨溶液補充媒染5分鐘既可。

三.染色后切片有黑色雜質，氣泡

1.雜質多為蘇木素染色液中的金屬膜粘附于載玻片上，每天染色前仔細過濾蘇木素染液或者使用半氧化蘇木素染色液

2.染色后切片經(jīng)過梯度乙醇脫水不徹底，導致封片后載玻片上殘留水分，也可能是封片是出現(xiàn)的氣泡

四.染色后細胞核呈棕色

1.蘇木素染液過度氧化或者染色后返藍時間不足，染色前檢查蘇木素的染色能力并即時更換試劑，然后適當延長返藍時間

五．切片染色不勻

1. 組織取材固定不當，如組織取材過大或過厚，不能將組織完全固定，組織切片染色后出現(xiàn)外周固定好的部分易著色，而中間未固定好的組織 ，細胞著色模糊，使染色不均。在送檢的標本中，及時用4%中性甲醛對標本固定，固定液應是標本的4倍。大標本應切開固定。

2. 切片薄厚不均或有橫紋。切片刀有缺口時，易造成斷裂，破碎和不完整。切片刀傾角過大上卷，不能連在一起，過小則切片皺起�；蛞蚵萁z松動產(chǎn)生振動切片易造成厚薄不均或技術人員手臂搖動切片機頭力量不均易造成橫紋。切片時檢查切片機螺母是否擰緊。

3. 組織脫水，透明和浸蠟處理不當，組織脫水用的各級乙醇未能保證相應濃度使組織脫水不徹底，二甲苯內(nèi)的時間過長組織易碎也無法切出好片子，浸蠟溫度過高，組織變脆也不利切片染色。

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