遺傳毒性試驗

一、簡介

遺傳毒性試驗是指用于檢測通過不同機制直接或間接誘導遺傳學損傷的受試物的體外和體內(nèi)試驗，這些試驗能檢測出DNA 損傷及其損傷的固定。

遺傳毒性試驗主要用于致癌性預測，遺傳毒性試驗結(jié)果可能對致癌性試驗的結(jié)果分析有重要作用。因此，在藥物開發(fā)的過程中，遺傳毒性試驗的目的是通過一系列試驗來預測受試物是否有遺傳毒性，在降低臨床試驗受試者和藥品上市后使用人群的用藥風險方面發(fā)揮重要作用。

隨著其不斷改進和更新，遺傳毒性試驗在食品、藥物、環(huán)境等各領域安全檢測及評價上得到了廣泛應用。

二、試驗方法 

遺傳毒性試驗常用的方法是采用不同檢測機理的遺傳毒性試驗的組合，即體內(nèi)試驗和體外試驗相結(jié)合、原核細胞與真核細胞相結(jié)合、不同試驗終點相結(jié)合，從而提高了檢測具有遺傳毒性藥物的能力。

活性篩選：Mini-Ames、微核檢測；

體外：Ames assay、細胞或人淋巴細胞體外染色體畸變實驗、小鼠L5178Y淋巴瘤細胞實驗、細胞體外微核實驗；

體內(nèi)：嚙齒動物（大鼠或小鼠）的骨髓微核實驗。

推薦的標準試驗組合包括：①一項細菌基因突變試驗；②一項哺乳動物細胞染色體損傷細胞遺傳學評價或小鼠淋巴瘤tk檢測體外試驗；③一項嚙齒類動物造血細胞染色體損傷試驗。

2.1 試驗動物選擇

哺乳動物體內(nèi)微核試驗常采用小鼠和大鼠，如合適也可選用其他哺乳動物。微核也可通過小鼠外周血中未成熟（如嗜多染）紅細胞或大鼠血液新生網(wǎng)織紅細胞測定。由于大鼠脾臟可清除血液中的微核化紅細胞，若采用大鼠外周血測定微核，需采用具有足夠靈敏度的檢測方法來測定新生網(wǎng)織紅細胞中的微核。

采用健康年輕性成熟動物，嚙齒類動物給藥起始年齡建議為6～10 周齡。一般情況下雌性和雄性動物微核反應相似，故可采用一種性別動物，如雄性。若性別間存在明顯的毒性或代謝方面的差異，則應采用兩種性別的動物，每組可分析的動物數(shù)雌雄至少各 5 只。如果受試物擬專用于一種性別，可選用相應性別的動物進行試驗。

起始試驗時，動物體重差異應在各性別平均體重的 20%之內(nèi)。

2.2 給藥劑量設計

至少應設置 3 個劑量組。

根據(jù)相關毒性試驗或預試驗的結(jié)果確定高劑量，高劑量應產(chǎn)生一定的毒性癥狀（如體重降低、造血系統(tǒng)細胞毒性）或骨髓毒性（如嗜多染紅細胞占紅細胞總數(shù)的比例降低超過 50%）。

2.3 給藥途徑選擇

一般情況下，給藥途徑應與臨床擬用途徑一致。若不一致， 應說明理由。但是，為獲得全身暴露，在適當時可進行調(diào)整，如局部給藥的受試物。

三、觀察指標 

結(jié)果中應描述各劑量組的毒性大小，包括一般癥狀、死亡情況等，以及 PCE/（PCE+NCE）或 RET/（RET+NCE）的比例； 結(jié)果表示為嗜多染細胞微核率（MNPCE）或網(wǎng)織紅細胞微核率（MNRET）。

受試物至少一個劑量組微核率顯著升高，該增加在至少一個采樣點具有劑量依賴性，且在陰性對照歷史范圍之外，可判定為陽性結(jié)果。

如果結(jié)果不是明確的陽性或陰性，或者為了幫助確定結(jié)果的生物學意義（如弱的或邊緣性增加），應對數(shù)據(jù)進行專家同行評議和/或進一步研究。有時候需要分析更多的細胞或者改變試驗條件進行重復試驗。