大鼠脂肪干細胞的分離
將手術(shù)切取的大鼠脂肪組織盡量剪碎后移至離心管,其余步驟與人脂肪干細胞的分離一致。
經(jīng)手術(shù)切除獲得的大鼠皮下脂肪組織消化后原代培養(yǎng)24 h,肉眼觀察會發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶底部貼附著一層網(wǎng)狀薄膜,輕輕搖晃培養(yǎng)瓶可使這層網(wǎng)狀薄膜從瓶壁上脫落,鏡下觀 察發(fā)現(xiàn)大部分細胞都附著于這層膜上,通過吸脂術(shù)獲取的人脂肪組織消化后則無此現(xiàn)象。增加膠原酶的量和消化時間也無法避免,取材時的毛細血管或脂肪間結(jié)締組織未被完全消化,穿過細胞篩進入了培養(yǎng)瓶并沉淀于瓶底部形成的。膠原蛋白酶雖然可以特異性水解膠原蛋白的三維螺旋結(jié)構(gòu),但不會損傷其他蛋白質(zhì)。處理方法是37 ℃下用胰蛋白酶 消化5 min。然后利用40 μm的細胞篩過濾后傳代。 根據(jù)作者的經(jīng)驗,每毫升手術(shù)切除的大鼠脂肪可分離基質(zhì)血管成分細胞約1.81×106個。原代培養(yǎng)2.24×10^7個大鼠基質(zhì)血管成分細胞,40 h后傳代時約剩余 6.2×10^6個細胞,細胞剩余率27%。